熒光素鉀鹽和5-氟-熒光素,作為Luciferase的作用底物,常用于以下實驗:
1. 報告基因分析
2. In vivo imaging (動物活體成像)
3. In vitro imaging (細胞體外分析)
4. ATP測定
5. 其它luciferase及其基因相關(guān)的分析和研究工作
2、熒光素鉀鹽應用于活體成像的基本原理
細胞中D-熒光素酶參與的化學發(fā)光反應遵守酶促反應的基本原理,在底物D-熒光素鉀過量的情況下,反應產(chǎn)生的光子數(shù)(發(fā)光量)與細胞中的D-熒光素酶的量成正相關(guān),從而可以推算出細胞的數(shù)量。
3、D-熒光素鉀鹽溶液的穩(wěn)定性
D-熒光素鉀鹽易溶于水和緩沖液,溶解度可高達25mg/mL。一般使用濃度為3-15 mg/mL。
溶液的pH值、溶液中的氧氣和保存時間對其保存過程中的穩(wěn)定性非常重要。當溶液的pH<6.5(發(fā)生水解作用)或>7.5(發(fā)生消旋化作用,D型轉(zhuǎn)化為L型)的情況下,D-熒光素鉀鹽相對不穩(wěn)定。如果溶液中存在少量的氧氣,將加速D-熒光素鉀的降解速度。
熒光素鉀鹽配成溶液后,在的保存條件(-80°C,pH,無氧氣)下,存在固定的降解速度:0.2%/天,因此配成溶液保存的D-熒光素應盡量在1年內(nèi)使用完。
有水存在的情況下,主要發(fā)生消旋化作用,即D-熒光素轉(zhuǎn)化成L-熒光素,有報道稱L-熒光素對熒光素酶催化的酶促反應有抑制作用。
4、D-熒光素、D-熒光素鈉和D-熒光素鉀之間的區(qū)別
主要區(qū)別在于溶解和分散性能。D-熒光素鉀鹽在水和緩沖液中的溶解度高,且溶解速度較快,故在一般的生物學試驗中常用D-熒光素鉀鹽。
5、熒光素鉀鹽的保存和運輸條件
保存條件:≤-20°C,避光,保持干燥。(在不打開包裝的條件下,可保存兩年時間)。
運輸條件:高純度的D-熒光素鉀鹽可在短時間內(nèi)常溫條件下保存,運輸條件為常溫。
原裝(沒有打開包裝)熒光素的包裝瓶中充有氬氣,保證其穩(wěn)定性,打開包裝后,請嚴格按照保存條件保存。
D-熒光素鉀鹽具有易溶于水的特性,其暴露于空氣中,易吸潮。在稱量過程中,請考慮其易吸潮的特性,先進行溫度平衡,再快速稱取